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克伦特罗(瘦肉精)残留检测分析:在线净化与固相萃取比较
点击次数:1001 发布时间:2014-10-19

在线净化LC-MS/MS系统对动物组织中克伦特罗残留的检测分析


 

http://www.thermo.com.cn/Resources/201104/29123547853.pdf

作者:赵孔祥1 王海鉴2
1. 天津出入境检验检疫局食检中心;2. 赛默飞世尔科技( 中国) 有限公司

克伦特罗俗称瘦肉精,常被用作饲料添加剂以提高家
畜的瘦肉含量,但由于其严重的毒副作用,欧盟于1988
年1 月1 日起禁止盐酸克伦特罗物质当饲料添加剂使用。
1991 年被FDA 禁止。1997 年,中华人民共和国农业部下
文严禁β- 肾上腺素类激素在饲料和畜牧生产中使用,盐酸
克伦特罗列为*位。2009 年7 月为应对日、韩从我国食
品中检出盐酸克伦特罗事件,质检系统确定了了更严格的
出口判定标准(0.05μg/kg),食品检测已经进入超痕量时代。
在此背景下,我们需要更有效的前处理手段以便我们
得到更加浓缩更加纯净的样品来提高我们的信号降低我
们的噪音。基于色谱原理的创新样品制备方法——Turbo
Flow 技术为我们提供了新的思路。这种在线自动过程处理
技术结合了扩散、化学和体积排除的原理,在捕获感兴趣
分析物的同时,快速消除基质干扰。本实验旨在建立一个
前处理简单,选择性灵敏度高的克伦特罗的Turbo Flow 实
用在线净化方法,并确定该方法的检出限。
1 实验部分
1.1 样品制备
取5g 动物组织样品与10mL 乙腈,10% 乙酸铵(1:3)
混合溶液混匀匀浆10 分钟,5000r/min 离心十分钟取
1mL 上清液经过0.22μm 注射过膜,上机。
1.2 Turbo Flow 条件
系统:
Thermo Scientific Aria
TLX-1 controlled by Aria. software
在线净化柱: Turbo Flow Cyclone MCX 0.5×50mm
进样体积: 50μL
上样溶剂: 0.1% 的甲酸水溶剂
上样流速: 2mL/min
洗脱溶剂: 1%的氨水甲醇溶液
洗脱体积: 50μL
1.3 HPLC 方法条件
色谱柱:Hypersil GOLD aQ 3μm 100 X 2.1mm
流路A :0.1% 的甲酸水溶液
流路B :甲醇
时间(min) A% B% 流速mL/min
0 90 10 0.4
1 90 10 0.4
2.33 80 20 0.4
2.83 60 40 0.4
6 10 90 0.4
6.5 10 90 0.4
8 90 10 0.4
1.4 质谱条件
1.4.1 调谐参数
系统 TSQ Ultra AM
离子源极性: 正离子模式
喷雾电压: 4500V
鞘气压(N2): 50arb
辅助气压(N2): 16arb
毛细管柱温度: 350°C
碰撞气体(Ar): 1.5mTorr
Skimmer offset 10V
Q1/Q3峰分辨度: 0.7u (单位质量)
1.4.2 SRM 反应参数
被分析组分
母离子
(m/z)
子离子
(m/z)
碰撞能量
(V)
管透镜电压
(V)
克伦特罗-D9 286 169.1 28 104
克伦特罗277 132.2 29 94
168.1* 28 94
203.6 15 94
* 为定量离子
2 结果与讨论
食物样品本身基质比较复杂,在进行检测之前往往
需要一个较长的样品预处理过程。比如贾晓飞等使用酶
解,高氯酸沉淀蛋白,邵兵等应用HLB 和MCX 两次SPE
对食品中β2- 受体激动剂进行残留检测都取得了很好的效
果,这些方法的目的也都是为了获得更加浓缩和纯净的样
品。应用Turbo-Flow 在线净化技术使得这些工作变得更加
图1 Turbo Flow 在线净化与HPLC 联用方法参数
热点聚焦 Hotspot
简洁方便,减少了中间步骤和偶然误差,使得加标回收的
重复性很稳定,0.05μg/kg 浓度下六平行RSD 为5.36% ;
同时由于样品更加纯净浓缩,干扰较少,此方法在添加量
为0.02μg/kg 浓度下峰型良好( 如图2 所示)。根据欧盟
法规计算此方法检出限(LOD) 为0.002μg/kg,定量限为
0.006μg/kg 已经能轻松应对实际需要。同时如果有实际
需要,可以采用更长的净化柱(100mm 规格) 或者采用串
联净化柱的方法进一步增加样品浓缩倍数,来提高检出限。
由于采用了在线净化系统,进入分析色谱柱的样品也更
图2 0.02μg/kg 浓度色谱图
图3 20pg/g 添加回收比较图。左图为MCX 固相萃取净化,右图为在线净化结果
为纯净,一定程度上降低了噪音和杂峰的产生。如图3 所示,
采用Turbo Flow 技术一定程度上起到了稳定基线的作用。
运用Transcend 在线净化系统的操作软件Aria OS 的
变量设置功能,可以方便设置批处理程序尝试不同的洗
脱溶液。在比较不同浓度的氨水甲醇溶液后,结果表明
1% 的氨水甲醇溶液作为洗脱溶液的效果zui优。使用外
标法计算其与不经过净化柱的结果得到其回收率为
79%~84%。而且此浓度的氨水甲醇溶液以0.2mL/min 的
速度与0.4mL/min 的分析柱溶液混合不会对液相色谱
产生不良影响,在使用此方法千针后,10 个平行的保留
时间RSD 仍然只有0.1%。
分别配置5pg/mL,10pg/mL,20pg/mL,50pg/mL,
100pg/mL,200pg/mL,500pg/mL,1ng/mL,2ng/mL
的克伦特罗标准溶液,其中都混有100pg/mL 内标,内标
法定量得到标准曲线有很好的线性( 曲线见图3),相关系
数R2 为0.9995
向5g 动物组织中分别添加100pg、250pg、500pg
克伦特罗标准,内标法定量,计算其回收率结果表明,经
过在线净化和内标法校正后样品回收率非常稳定。简单的
前处理步骤带来zui少的偶然误差。
表1 克伦特罗不同添加水平回收率
添加水平平均回收率% RSD%*
20pg/g 94.2 5.58
50pg/g 96.5 5.36
100pg/g 94.4 2.49
* 为六平行水平下RSD 值
3 结论
采用Turbo Flow 在线净化技术可以非常方便的按要求
得到更加浓缩,干扰更少的样品,提高了信噪比,降低了
检出限。
Turbo Flow 图4 克伦特罗标准曲线在线净化技术简化了前处理步骤,减少了
热点聚焦 Hotspot
偶然误差获得了令人满意的重现性。
使用Aria OS 操作系统,我们可以很方便的设置批处
理变量,尝试不同种类或者比例的上样或者洗脱溶剂。
4 参考文献
[1] Lee D W, Mona I C, Daniel R D. J Chromatogr B. 2004,
813: 35-45
[2] Jose B, Patricia M, Miguel M, et al. Anal Chim Acta.
2005, 529 : 199-205
[3] Doerge D R,Churchwell M I,Holder C L,et al.Anal
Chem,1996,68(11):1918
[4] Joseph HWL and Cheang SK. J AOAC Int. 2004, 87 : 31-
38 3 贾晓飞,蔡增轩,潘红锋
[5] 任一平. 超液相色谱- 电喷雾串联四极杆质谱法
检测动物组织中的 20 种β2- 受体激动剂的残留. 卫
生研究 2007,04
[6] 吴国华,邵兵,孟娟. 气相色谱- 质谱测定尿液中的
克伦特罗. 中国公共卫生,2004, 20 (2): 235~236

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